В Смитсоновском институте в Вашингтоне наступила ночь. Экскурсоводы разошлись по домам, свет погашен, школьники сладко спят в свои кроватках... Однако происходит нечто невероятное, и бывший ночной сторож Ларри Дейли (Бен Стиллер) оказывается втянутым в самое грандиозное и потрясающее приключение в своей жизни, в котором история на самом деле оживает. Во второй части саги Night at the Museum Ларри становится свидетелем эпической битвы такого масштаба, которая могла развернуться только в залах самого большого музея в мире. Теперь Ларри предстоит спасти своих некогда неодушевленных друзей от того, что может оказаться их последней битвой, среди диковинных экспонатов Смитсоновского института, каждый из которых, от знаменитых картин на стенах до космических кораблей в павильонах, внезапно обзаводится своим собственным мнением.